Очистка и свойства - GTP- циклогидролазы Bacillus subtilis

Abstract

Из клеток Bacillus subtilis посредством фракционирования экстрактов сульфатом аммония и использования ионообменной и гидрофобной хроматографии получен высокоочищенный препарат GTP-циклогидролазы. Определены N-концевая аминокислотная последовательность и общий аминокислотный состав белка. По данным электрофореза в присутствии DS-Na молекулярная масса фермента составляет 45 кДа. Активный фермент существует в нескольких формах, хорошо разделяющихся при нативном электрофорезе. Максимальная ферментативная активность обнаруживается при наличии в реакционной среде 1,5 мМ Мп2+, в присутствии ионов Mg2 + проявляется 70% ферментативной активности. Активность фермента ингибируется ионами тяжелых металлов, хелатирующими агентами и не проявляется в отсутствие гиолвосстапавливающих соединений. Фермент активен в широком диапазоне рН с максимумом при рН 8,2. Очищен и идентифицирован пиримидиновый продукт циклогидролазной реакции — 2,5-диамино-6-окси-4-рибозиламинопиримидин-5'- фосфат. В ходе реакции из GTP образуется также пирофосфат.